產(chǎn)品介紹：

產(chǎn)品名稱：RT-(RT-)抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌探針法熒光定量PCR試劑盒

英文名稱：Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae(R-Kp)

產(chǎn)品貨號：LZ-P3371

規(guī)格：50T

分類：PCR檢測試劑盒

儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

運(yùn)輸：低溫、避光。

有效期：一年

實(shí)驗(yàn)步驟：

一．樣品制備

1．PCR擴(kuò)增并檢測。根據(jù)不同的引物挑選適合的退火溫度進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物用2-2.5%的瓊脂糖膠跑水平電泳檢測，上樣量3-5ul。PCR產(chǎn)物為10ng/nl左右為佳。上海

2．PCR產(chǎn)物與變性buffer混合。在干凈的PCR管底部加入5ul SSCP上樣緩沖液（變性緩沖液，同《分子克隆》中的測序緩沖液），然后在緩沖液中央加入PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。按照經(jīng)驗(yàn)，擴(kuò)增效果在瓊脂糖膠上能看出比較亮的帶的樣品加1ul，效果很好加0.5ul，如果不太好就適當(dāng)增加1.5、2或3不等，同時(shí)加大上樣緩沖液的量，比如加3ul的PCR產(chǎn)物，緩沖液加到8ul變性效果更好。

3．PCR產(chǎn)物變性。加好的樣品進(jìn)行離心，使樣品集中在管底。PCR儀上95℃變性10分鐘，立即取出PCR產(chǎn)物連同架子一同置于冰上靜置5min，以免變性的產(chǎn)物復(fù)性。

如何進(jìn)行 PCR 實(shí)驗(yàn)？

一、抗碳青霉烯肺炎準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料（1）DNA模板：包含你想要復(fù)制的DNA區(qū)域。（2）引物：短的單鏈DNA片段，用于指導(dǎo)DNA合成的起始位置。（3）DNA聚合酶：一種酶，用于合成DNA。（4）四種脫氧核苷酸（dNTPs）：DNA的構(gòu)建塊。（5）緩沖液：提供適宜的反應(yīng)環(huán)境。（6）鎂離子或其它必需的離子：通常作為DNA聚合酶的輔助因子。 二、設(shè)定反應(yīng)混合物將所有材料混合在微量離心管中?；旌衔锏目傮w積通常在20-50微升之間。

1. 3. PCR程序（1）將混合物放入PCR機(jī)（熱循環(huán)儀）中，并設(shè)定程序。PCR程序通常包括以下階段：（2）初次變性：加熱至94-98°C，持續(xù)幾分鐘，使DNA雙鏈解開成單鏈。（3）循環(huán)步驟（通常進(jìn)行30-40次循環(huán)）：（4）變性階段：加熱至94-98°C，持續(xù)20-30秒，使DNA雙鏈解開。（5）退火階段：降溫至50-65°C，持續(xù)20-40秒，允許引物與模板DNA結(jié)合。（6）延伸階段：加熱至72°C，持續(xù)1分鐘每1千個(gè)堿基，以便DNA聚合酶合成新的DNA鏈。（7）后延伸：在72°C下持續(xù)5-10分鐘，確保所有可用的DNA模板都被復(fù)制。（8）保持階段：將溫度降至4-15°C，直到用戶準(zhǔn)備取出樣品。

PCR實(shí)驗(yàn)的基本步驟：

DNA聚合酶是實(shí)驗(yàn)室中常用的生物學(xué)酶之一，在PCR實(shí)驗(yàn)中具有重要的作用。實(shí)驗(yàn)室常用的DNA聚合酶，包括Taq聚合酶、Pfu聚合酶和Tth聚合酶。

一、探針法熒光定量PCRTaq聚合酶：

Taq聚合酶是由Thermus aquaticus細(xì)菌產(chǎn)生的一種DNA聚合酶，在分子生物學(xué)研究中得到廣泛應(yīng)用。Taq聚合酶具有熱穩(wěn)定性，可以在高溫條件下保持活性，這是由于其來源于熱液生物，能夠存活和正?；顒佑诟邷丨h(huán)境。這使得Taq聚合酶在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）中起到關(guān)鍵的作用。Taq聚合酶能夠按照DNA模板合成新的DNA鏈，因此在PCR中用于擴(kuò)增目標(biāo)DNA片段。然而，Taq聚合酶缺乏3'-5'外切酶活性，導(dǎo)致其生成的PCR產(chǎn)物末端容易出現(xiàn)額外的腺嘌呤堿基。因此，在某些應(yīng)用中，需要使用具有外切酶活性的聚合酶。

二、Pfu聚合酶：

PCR法Pfu聚合酶是由Pyrococcus furiosus細(xì)菌產(chǎn)生的一種DNA聚合酶。與Taq聚合酶相比，Pfu聚合酶具有更高的熱穩(wěn)定性和耐酶性。這使得Pfu聚合酶在高溫PCR反應(yīng)中表現(xiàn)出色，其高度穩(wěn)定的酶活性能夠確保PCR反應(yīng)的可靠性和準(zhǔn)確性。此外，Pfu聚合酶還具有3'-5'外切酶活性，可以修復(fù)并糾正PCR反應(yīng)中的腺嘌呤堿基誤配，有效防止誤差累積。因此，Pfu聚合酶適用于需要高度準(zhǔn)確的PCR擴(kuò)增和DNA測序。

三、Tth聚合酶：

Tth聚合酶是由Thermus thermophilus HB8細(xì)菌產(chǎn)生的一種DNA聚合酶。與Taq聚合酶和Pfu聚合酶不同，Tth聚合酶具有熱活性反轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄酶活性，可以將RNA模板合成相應(yīng)的DNA鏈。因此，Tth聚合酶在逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）中得到廣泛應(yīng)用，用于將RNA轉(zhuǎn)錄成DNA，并通過增加熱活性酶來實(shí)現(xiàn)PCR擴(kuò)增。此外，Tth聚合酶還具有一定的外切酶活性，可用于修復(fù)和校正PCR產(chǎn)物的末端。

人胱天蛋白酶激活的脫氧核糖核酸酶(CAD)ELISA

小鼠表皮生長因子受體(EGFR)試劑盒 Mouse Epidermal growth factor receptor,EGFR ELISA kit

胸腺肽β4(Thymosin β4)PCR檢測試劑盒 ， Thymosin β4 ELISA Kit

MousegranzymesB,Gzms-BPCR檢測試劑盒小鼠顆粒酶B(Gzms-B)PCR檢測試劑盒

ELISAKitINS兔子規(guī)格：48T/96T

C3ELISAKit鮭魚補(bǔ)體蛋白3(C3)PCR檢測試劑盒

Anti-Phospho-EGFR(Tyr845) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠0酸化表皮生長因子受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-HSA/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記鼠抗人血清白蛋白單克隆抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh C21orf128 21號染色體開放閱讀框128抗體 規(guī)格 0.2ml

TY3H ( Tyrosine Hydroxylase ) 酪酸羥化酶(抗原) 0.5mg

phospho-HSF1(Ser326) 英文名稱： 0酸化熱休克因子1抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh S100A7/Psoriasin S100鈣結(jié)合蛋白A7抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-HSA/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記鼠抗人血清白蛋白單克隆抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

RT-(RT-)抗碳青霉烯肺炎克雷伯菌探針法熒光定量PCR試劑盒EGF(Human Epidermal growth factor) ELISA Kit 人表皮生長因子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-CSF3 粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Guinea pig IgG/PE PE標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG 規(guī)格 0.1ml

ANG-1(Human Angiopoietin 1) ELISA Kit 人血管生成素1 96T

phospho-c-Raf(Ser338) 英文名稱： 0酸化原癌基因c-Raf抗體 0.1ml

phospho-CK18(Ser34) 英文名稱： 0酸化細(xì)胞角蛋白18抗體 0.1ml

Anti-CSF3 粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml