影響ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的因素
一、試劑盒
1、抗原、抗體活性對(duì)效價(jià)的影響：主要是試劑中抗體(或抗原)的效價(jià)降低或失活，結(jié)果不易判斷。再有ELISA法靈敏度高，對(duì)雜質(zhì)的反應(yīng)靈敏度也高，實(shí)驗(yàn)中空白對(duì)照OD值偏高或假陽(yáng)性;
2、酶結(jié)合物濃度過(guò)高，也會(huì)導(dǎo)致OD值假性增高。
二、試驗(yàn)儀器
1、ELISA試劑盒加樣器是否經(jīng)過(guò)校正，酶免測(cè)定血清用血量很少，如手工加樣器的性能不好，吸取樣品不，會(huì)使結(jié)果忽高忽低;
2、每次洗板前，應(yīng)檢查洗板機(jī)針孔有無(wú)堵塞。
三、操作
1、檢測(cè)前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用，試劑用完及時(shí)放回冰箱冷藏，以免造成試驗(yàn)結(jié)果假性降低;
2、加樣時(shí)注意勿觸及包被板底部，以免擦傷包被物使抗體(抗原)脫落而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性;
3、洗滌不充分，會(huì)使結(jié)果假性增高，過(guò)分洗滌呈假陰性;
4、比色時(shí)應(yīng)保持包被孔底部無(wú)異物、無(wú)水汽，特別是冬季板從37℃水浴箱取出時(shí)，底部留有水汽，應(yīng)將板底擦干后進(jìn)行比色，水汽或孔內(nèi)氣泡也會(huì)使OD值升高;
5、抗原與抗體反應(yīng)達(dá)到完全平衡，依賴于溫度與時(shí)間。溫度45℃易引起失活及標(biāo)記物脫落，溫度低于4℃，影響反應(yīng)速度。

區(qū)分ELISA試劑盒的方法：
一：選定一個(gè)檢測(cè)范圍內(nèi)的濃度做多孔重復(fù)，可看出平行性好不好。即板內(nèi)CV值的大小，此操作時(shí)需求當(dāng)心加樣的性。對(duì)一些制造較粗糙的試劑盒來(lái)說(shuō)，板間CV值是較大的。
二：可選用已知濃度的重組細(xì)胞因子，稀釋到檢測(cè)范圍內(nèi)作為樣本參加，看檢測(cè)的性。
三：對(duì)用待測(cè)目標(biāo)的重組細(xì)胞因子做試劑盒說(shuō)明書上標(biāo)定的小濃度稀釋，可測(cè)出靈敏度，主張5個(gè)復(fù)孔以上才有含義。一般廠家以20個(gè)復(fù)孔做出的成果作為檢測(cè)限。用此實(shí)驗(yàn)可驗(yàn)證出所購(gòu)試劑盒的靈敏度是否如說(shuō)明書所述，也可判別出所購(gòu)試劑盒是否有夸張之說(shuō)。
四：如果有相同目標(biāo)的試劑盒，可用對(duì)方的標(biāo)準(zhǔn)品作為樣本，分別參加各自的試劑盒做檢測(cè)，以檢測(cè)試劑盒的真實(shí)性，性。如其中一種是的，比較牢靠的話，可作為標(biāo)準(zhǔn)來(lái)驗(yàn)證另一試劑盒的程度。

操作步驟

　　1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀 釋。

　　200ng/L

　　5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

　　150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　100ng/L

　　4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

　　150μl 的 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　50ng/L

　　3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

　　150μl 的 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　25ng/L

　　2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

　　150μl 的 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　12.5ng/L

　　1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

　　150μl 的 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、 待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測(cè)樣品 10μl(樣品終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

　　3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

　　4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

　　5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。

　　6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。

　　7. 溫育：操作同 3。

　　8. 洗滌：操作同 5。

　　9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

　　10 分鐘.

　　10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

　　11. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

ELISA【實(shí)驗(yàn)原理】
ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
試劑盒內(nèi)含有分析所需的所有必需試劑，操作簡(jiǎn)單便捷；試劑盒內(nèi)組分經(jīng)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，確保更高的檢測(cè)靈敏度

規(guī)格: 96T/48T

酶標(biāo)儀檢測(cè)波長(zhǎng): 450 nm

所需樣本體積: 50-100ul

雙贏供應(yīng)種屬：大小鼠、豚鼠、兔子、牛、羊、豬、雞、植物ELISA試劑盒等

檢測(cè)目的：用于測(cè)定血清，血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。

適用范圍:僅供科研

貯存方法：試劑盒未拆開，4℃保存。已拆開，標(biāo)準(zhǔn)品-20℃保存，其它4℃保存。

有效期：6個(gè)月
ELISA試劑盒產(chǎn)品用途：

【靈敏度高】：由于抗體聯(lián)結(jié)上了酶，因此借助于酶與底物的顯色反應(yīng)，顯示抗原與抗體的結(jié)合，大大提高了檢測(cè)的靈敏性，從而使檢測(cè)水平接近放射測(cè)定法。

【專一性強(qiáng)】：抗原和抗體的反應(yīng)是專一反應(yīng)，而酶技術(shù)以反應(yīng)為基礎(chǔ)，所檢測(cè)的對(duì)象是抗原（或抗體），使用的抗體除標(biāo)記了酶以外，與普通抗體的反應(yīng)特性并無(wú)多大差別。

保質(zhì)期： 2-8℃保存，切勿冷凍，有效期為六個(gè)月